دانلود پروپوزال آماده:  تولید کالوس از ریزنمونه های گیاهک نخود شیرین ( Lathyrus odoratus L. ) تولید شده در شرایط کشت درون شیشه ای و

قسمت هایی از پروپوزال:

۱- بیان مسأله:

در چند دهه گذشته با انجام تحقیقات متعدد در زمینه زیست فن آوری^[۱] کشاورزی، این بخش دارای جایگاه مهم و با ارزشی شده است. این روش این امکان را فراهم می سازد که با استفاده از فنون مختلف از قبیل دست ورزی ژنتیکی^[۲]، کشت بافت^[۳] و کشت سلول گیاهی در شرایط درون شیشه‏ای^[۴]، گیاهانی با ساختار ژنتیکی متفاوت و در نتیجه واریته‏های با عملکرد بیشتر و مقاوم به آفات و بیماری‏ها و علف های هرز و متحمل به تنش‏های محیطی، تولید نماید (چاولا^[۵]، ۲۰۰۰). شیوه کشت بافت گیاهی طیف وسیعی از روش‏ها را شامل می شود. از جمله این روش‏ها، باززایی از بافت‏های جنینی، قطعات سایر بافت‏ها، کالوس، سلول‏های جدا شده و یا پروتوپلاست را می توان نام برد. باززایی گیاهک^[۶]  از طریق کشت بافت یک نیاز اساسی برای استفاده ژنتیک مولکولی است. یکی از روش‏های کشت بافت، باززایی گیاهک‏ها است که از طریق تشکیل گیاهک‏ها با القاء ساقه‏های نابجا^[۷]، جنین های رویشی^[۸] و یا جوانه‏های جانبی^[۹]  امکان پذیر می شود. در این صورت ساقه‏های نابجا یا جنین های رویشی از کالوس و یا به طور مستقیم از ریز نمونه بدست می آید (پیریک، ۱۹۸۵). این روش می تواند به منظور بهبود و اصلاح گیاهان^[۱۰]، تولید گیاهان عاری از عوامل بیماری زا یا پاتوژن^[۱۱]، نگهداری ژرم پلاسم^[۱۲]، تکثیر انبوه^[۱۳] و تولید و تکثیر همگروه‏ها^[۱۴] (گیاهانی با ساختار ژنتیکی یکسان) مورد استفاده قرار می گیرد (لویولا و وازکوز^[۱۵]، ۲۰۰۶). روش های کشت بافت بر این حقیقت تاکید دارد که خیلی از سلول های گیاهی، پتانسیل و ظرفیت دارند که قادر به باززایی یک گیاه باشند که به آن توتی پوتنسی^[۱۶] می گویند (آکین آیدو و همکاران^[۱۷]، ۲۰۰۹). فاکتورهای مهمی که در کشت بافت باید مورد توجه قرار گیرند شامل موقعیت فیزیولوژی گیاه مادری، انتخاب ریزنمونه، مبدا و اندازه ریزنمونه^[۱۸]، انتخاب محیط کشت مناسب برای ریزنمونه، قطبیت و تعادل هورمونی در محیط کشت می باشند.

کشت بافت شامل مراحل زیر می باشد: الف) تهیه ریزنمونه و گندزدایی ریزنمونه، ب) تولید کالوس، ج) باززایی از کالوس (باززایی غیرمستقیم)، د) ریشه زایی، ه) سازگاری و انتقال به گلخانه (تاجی و همکاران، ۲۰۰۳). کالوس، توده‏ای از سلول‏های پارانشیمی بی شکل با دیواره سلولی نازک است که در شرایط طبیعی و یا در محیط کشت درون شیشه ای به صورت سازمان نیافته رشد می کند. هنگامی که گیاه زخمی یا بریده می شود، در محل زخم کالوس تشکیل می شود (پیریک، ۱۹۸۵). در روش باززایی غیر مستقیم عموما تولید گیاهان با واسطه کالوس صورت می گیرد. یعنی ابتدا بافت ریز نمونه وادار به تشکیل کالوس می شود و سپس از کالوس اندام زایی صورت می گیرد (شریفی و همکاران، ۱۳۸۹).

معمولا از پنج گروه تنظیم کننده های رشد گیاهی^[۱۹] در کشت بافت، بیشتر از اکسین‏ها^[۲۰]، سیتوکینین‏ها^[۲۱] و جیبرلین^[۲۲] استفاده می شود (شریفی و همکاران، ۱۳۸۹). پرآوری شاخه^[۲۳]، یک مرحله از فرآیند ریزازدیادی است که به عنوان یکی از مراحل اصلی علم بیوتکنولوژی در نظر گرفته می شود. این فرآیند تولید ʾʾشاخه از جوانهʿʿ از زمان کشف سیتوکینین و ترکیبات شبه سیتوکینین از طریق ساخت مصنوعی به دست آمد (دامیانو و همکاران، ۲۰۰۰). در اندام زایی مستقیم^[۲۴]، قسمتی از بافت گیاه (ریزنمونه) جدا شده و در شرایط عاری از آلودگی به محیط کشت مناسب منتقل می شود. سپس با تغییر غلظت مواد تنظیم کننده رشد در محیط کشت، اندام مورد نظر تشکیل می شود (موراشیگ ^[۲۵]، ۱۹۷۴).

نخود شیرین با نام علمی Lathyrus odoratus L. یک گیاه یک ساله و گلدار از تیره بقولات می باشد. این گیاه بومی ناحیه شرق مدیترانه است. Lathyrus odoratus یک گیاه بالارونده است و ارتفاع آن معمولا به ۱ تا ۲ متر می رسد که به قیم مناسب نیاز دارد. گل ها و برگ ها شبیه نخود معمولی است. برگ ها به صورت مرکب شانه ای^[۲۶] با دو برگچه و یک پیچک انتهایی هستند که به دور قیم می پیچند و به بالا رفتن گیاه کمک می کند. ساقه این گیاه پهن و بالدار است. در حالت عادی در مناطق معتدله، گل‏ها در اواخر تیرماه و اوایل مردادماه ظاهر می شوند و تا اوایل پاییز گلدهی ادامه دارد. اگر در گلخانه در مرداد کشت شود در دی و بهمن گل می دهد. گل ها معمولا به رنگ ارغوانی هستند و ۲ تا ۵/۳ سانتیمتر عرض دارند. در گونه های وحشی گل‏ها بزرگ‏تر و تنوع بیشتری در رنگ گل مشاهده می شود. بعضی از ارقام نخود شیرین حالت رشد پاکوتاه دارند که ارتفاع آنها به ۳۰ سانتیمتر می رسد که معمولا گل‏های ساده دارند. این گیاه جهت کشت در گلدان های بزرگ و آویزان کردن در بالکن‏ها مناسب است. بر خلاف اکثر نخودها، بذور نخود شیرین سمی هستند و دارای نئوروتوکسین^[۲۷]  هستند که قابل خوردن نیستند (اوچات و همکاران، ۲۰۰۷). عارضه ای که بوسیله خوردن بذر نخود شیرین ایجاد می شود اودوراتیسم^[۲۸] یا لاتیریسم^[۲۹] نخود شیرین نام دارد.

نخود شیرین در قرن هفدهم به عنوان یگ گل مطرح شد و کشت شد و ارقام آن به صورت تجاری قابل دسترس شد. این گونه اغلب بوسیله باغداران به جهت داشتن رنگ‏های زیبا و عطر دلپذیر کشت می شود که هم به عنوان گل بریدنی و هم کاشت در باغچه، حاشیه و سبدهای آویزان استفاده می شود. بهترین خصوصیت آن عطر دلپذیری و شیرینی است که سرتاسر فضای اطراف خود را معطر میکند و به همین دلیل آنرا به این اسم می نامند. گل شاخه بریده آن نیز تا حدودی مطرح شد ولی به دلیل عمر کوتاه گل شاخه بریده آن مورد استقبال قرار نگرفت ولی در ژاپن از گل شاخه بریده آن استفاده می شود. ارقامی که در تابستان گل می دهند در شمال اروپا و آمریکا محبوب تر هستند و برای آغازش گل به ۱۲ ساعت طول روز نیاز دارند ولی ارقامی که به عنوان گل شاخه بریده مطرح هستند زودتر گل می دهند و روز کوتاه هستند. در ژاپن با استفاده از تیمار سرمادهی بذر ارقام تابستانه را پیش رس می کنند (پارسونز^[۳۰]، ۲۰۰۰).

جنس Lathyrus دارای چند گونه وحشی^[۳۱] نخود است و با وجود اینکه پتانسیل بالایی از نظر منبع ژنتیکی برای صفات مهمی از جمله مقاومت به تنش دارند، نادیده گرفته شده اند. با این حال، گونه های تجاری مهمی در این جنس وجود دارند از جمله نخود شیرین که ارزش زینتی بالایی دارند. تحقیقات زیادی در زمینه کشت بافت در مورد نخود شیرین انجام نشده است. نخستین گزارش منتشر شده درباره کشت بافت Lathyrus odoratus، بوسیله رازدان^[۳۲] و همکاران در سال ۱۹۸۰ می باشد که با استفاده از جداسازی پروتوپلاست مزوفیل برگ موفق به باززایی کالوس شدند. اوچات^[۳۳] و همکاران در سال ۲۰۱۰ موفق به ازدیاد درون شیشه‏ای نخود شیرین بوسیله شاخه‏های جانبی شدند و گیاهک کامل تولید کردند. در این بررسی یکی از اهداف، تولید شاخساره بود. این هدف از دو جهت بررسی شد. ۱- تولید شاخساره به روش مستقیم (کشت ریزنمونه در محیط کشت جهت تولید شاخساره) ۲- تولید شاخساره به روش غیر مستقیم که شامل کشت ریزنمونه در محیط کشت های کالوس زایی و سپس کشت قطعات کالوس در محیط کشت های تولید شاخساره است. سپس ریشه زایی شاخساره های تولید شده و تولید گیاهک کامل هدف دیگر این پژوهش بود.

[۱] Biotechnology

[۲] Genetic manipulation

[۳] Tissue culture

[۴] In vitro cell culture

[۵] Chawla

[۶] Plantlet

[۷] Adventitious shoots

[۸] Somatic embryos

[۹] Axillary buds

[۱۰] Plant modification and improvment

[۱۱] Pathogens-free plants

[۱۲] Germplasm storage

[۱۳] Mass propagation

[۱۴] Production and propagation of clones

[۱۵] Loyola-Vargas and Vazquez- Flota

[۱۶] Totipotency

[۱۷] Akin-Idowu et al.

[۱۸] Explant size

[۱۹] Plant Growth Regulators

[۲۰] Auxins

[۲۱] cytokinins

[۲۲] Gibberellin

[۲۳] Shoot proliferation

[۲۴] Direct organogenesis

[۲۵] Murashige

[۲۶] Pinnate

[۲۷] Neurotoxin

[۲۸] Odoratism

[۲۹] Lathyrism

[۳۰] Parsons

[۳۱] Wild

[۳۲] Razdan

[۳۳] Ochatt

……………………………

۲- اهمیت و ضرورت تحقیق:

……………………………

۳- پیشینه تحقیق:

……………………………

۴- اهداف تحقیق:

…………………………………….

۵- فرضيه ‏هاي تحقیق:

…………………………………….

۶- مدل تحقیق

…………………………

۷- سوالات تحقیق:

…………………………………….

۸- تعريف واژه‏ها و اصطلاحات فني و تخصصی (به صورت مفهومی و عملیاتی):

…………………………………….

۹- بیان جنبه نوآوری تحقیق:

………………………….

۱۰- روش شناسی تحقیق:

الف: شرح كامل روش تحقیق بر حسب هدف، نوع داده ها و نحوه اجراء (شامل مواد، تجهيزات و استانداردهاي مورد استفاده در قالب مراحل اجرايي تحقيق به تفكيك):

………………………….

ب- متغيرهاي مورد بررسي در قالب یک مدل مفهومی و شرح چگونگی بررسی و اندازه گیری متغیرها:

…………………………………….

ج – شرح کامل روش (ميداني، كتابخانه‏اي) و ابزار (مشاهده و آزمون، پرسشنامه، مصاحبه، فيش‏برداري و غيره) گردآوري داده‏ها :

…………………………………….

د – جامعه آماري، روش نمونه‏گيري و حجم نمونه (در صورت وجود و امکان):

…………………………………….

ر- روش نمونه گیری و حجم نمونه:

…………………………………….

ز- ابزار تحقیق:

…………………………………….

هـ – روش‌ها و ابزار تجزيه و تحليل داده‏ها:

…………………………………….

منابع :

…………………………………….

آسان داک: www.Asandoc.com

دانلود نمونه پروپوزال تکمیل شده، پروژه پر شده، طرح پیشنهادیه آماده